Cystone 255

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urolitiasis de oxalato de calcio se ha convertido en un problema creciente en muchos países debido a las variaciones geográficas / genéticos y los estilos de vida modernos. Las personas que viven en la sequía y la zona árida sufren más de la absorción intestinal de hiper oxalato de calcio que conduce a cálculos renales. Se estima que 12). Muchos factores afectan el crecimiento de los cálculos urinarios en el que el metabolismo mineral juega un papel importante 3. Las modalidades de tratamiento como la cirugía y la terapia de drogas se practican en la gestión de las piedras en el riñón, pero tienen algunas limitaciones. Los procedimientos quirúrgicos como (Litotripsia) LEC tienen mayor riesgo de recurrencia de los cálculos y también no son asequibles para los enfermos pobres. El arsenal de agentes terapéuticos también no tiene ningún fármacos efectivos a excepción de algunos diuréticos como las tiazidas y furosemida. Esto justifica la búsqueda de nueva terapia con medicamentos que será rentable y puede apuntar a múltiples factores de riesgo etiológicos en la urolitiasis. Ayurveda, una auténtica literatura clásica de la India, informó sobre el uso tradicional de Goskshuradi formulación poliherbal (GPF) y se practica desde hace muchos años en el tratamiento de los cálculos renales. En nuestros estudios clínicos preliminares, GPF ha revelado expulsión de cálculos renales en pacientes naturalmente producido urolithic que fue confirmado por análisis de rayos X realizado antes y después de cuatro semanas de tratamiento 4. GPF consta de cinco partes de diferentes plantas medicinales, esto es, las frutas secas de Tribulus terrestris L. semillas de Hygrophila spinosa T. Anders, y las raíces de Ricinnus communis L, Solanum Anguivi Lamk. y Solanum surattense Burm. GPF decocción se preparó mezclando el polvo fino de estas piezas individuales a la misma proporción como se ha mencionado en la literatura ayurvédica y luego se administró a los pacientes. Las plantas de componentes individuales de GPF se sabe que poseen diversas actividades farmacológicas. En la medicina ayurvédica, se recomiendan los frutos de T. terrestris L. para el tratamiento de trastornos urinarios disfunción eréctil, y en la medicina tradicional china, que ha sido utilizado como un antihipertensivo en la enfermedad coronaria 5. También estimula la proliferación de los melanocitos y por lo tanto es un tratamiento putativo para Vitiligo junto con su antibacteriana conocida y actividades citotóxicas 6. 7. H. spinosa T. Anders, otro componente de esta formulación se ha utilizado en Ayurveda para varias enfermedades como ictericia, obstrucción hepática, reumatismo, inflamación, dolor, diurético y afrodisíaco y en el tratamiento de trastornos urinarios 8. 9. Esta planta es conocida por poseer actividad hipoglucemiante en sujetos humanos 10, 11, antitumoral hematínicos 12, 13 antinociceptivo, hepatoprotector 14. Las actividades 15, eliminadores de radicales libres y la peroxidación de lípidos 16. R. communis tallos tienen anticancerígeno, antidiabético, y la actividad antiprotozario 17. Solanum Anguivi (Lam.), También conocido como Solanum indicum sp. distichum (Schumach. y Thonn.), se cultiva con fines culinarios en muchas partes de África, la India, y la Península Arábiga. Los frutos de esta planta se utilizan como vegetales nutritivos a causa de su alto contenido de almidón, calcio, vitamina A, ácido ascórbico, y fosfato. xanthocarpum Solanum (SX) Schrad. Wendl. (Familia: Solanaceae) se conoce comúnmente como la sombra noche indio o amarillo sombra noche berried encuentra en la india, sobre todo en lugares secos como una mala hierba a lo largo de los caminos y terrenos baldíos 18. Se ha ocupado un lugar de cierta importancia en la India Materia Medica, principalmente como expectorante y antipirético. Varias propiedades medicinales se atribuyen a la misma, en particular en el tratamiento del asma, tos crónica, y la fiebre catarral 19. Es uno de los miembros de la dashamula (diez raíces) de la Ayurveda 20. En el Ayurveda, esta planta es descrito como picante, amargo, digestivo, astringente y alternativa. Sus tallos, flores, frutos y son amargas, carminativo. decocción de la raíz se utiliza como febrífugo, diurético y expectorante eficaz 21. Aunque, GPF es bien reconocida en la medicina tradicional de la India que tienen efecto antiurolithic, pero no hay datos científicos han sido publicadas en apoyo de su mecanismo de acción subyacente en los cálculos de oxalato de calcio. Por lo tanto se propuso este estudio para determinar el potencial terapéutico y mecanismo de acción de los extractos acuosos de esta formulación en la gestión de la urolitiasis mediante el empleo in vitro y en métodos in vivo. 2. Material y Métodos 2.1. Productos químicos y reactivos Todos los productos químicos utilizados fueron de grado analítico. etilenglicol, timol, glutatión reducido, 5-5-ditiobis, ácido 2-nitrobenzoico, ácido tiobarbitúrico, furosemida, H 2 O 2. ácido tricloroacético, 1,1,3,3, - tetraethoxypropane, e hidrocloruro de guanidina se obtuvieron de Sigma Chemical Company, St. Louis, MO, EE. UU.. Los reactivos utilizados para las preparaciones histológicas fueron eosina espíritu soluble, hematoxilina y xileno a partir de Himedia Chemical Limited, Bombay, India. Kits utilizados en este estudio para la determinación de calcio, magnesio, nitrógeno ureico en sangre (BUN), creatinina, superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa, oxalato, citrato y se adquirieron de Spinreact, Alemania, y el diagnóstico Ambika, India. 2.2. Materiales de plantas Las plantas utilizadas para la formulación se obtuvieron de los bosques locales del Distrito Nanded, Maharashtra, India y autenticados por los expertos. Bono especímenes fueron depositados en el herbario de la Facultad de Ciencias de la Vida, S. R.T. M. Universidad, Maharashtra, India. partes respectivas de cada planta como se mencionó anteriormente se recogieron y luego se secan sombra. partes secas fueron limpiados de materias extrañas y luego puestos a tierra, polvo fino en un molinillo. 2.3. Estándar de Drogas Cystone formulación poliherbal del Himalaya Drug Co. Bangalore, India se utilizó como tratamiento estándar en este estudio. La formulación contenía Didymocarpus pedicellata. ligulata Saxifraga. Rubia cordifolia. scariosus Cyperus. Achyranthes aspera. bracteatum Onosma. cinerea Vernonia. Shilajeet purificada. y Hajrul Yahood Bhasma. 2.4. Efecto antioxidante in vitro Efecto antioxidante de GPAE se determinó por actividad de barrido y la peroxidación lipídica efectos inhibidores de radicales libres. 0.1 DPPH de eliminación de radicales que se calculó en la ecuación utilizando la solución de DPPH como control. la actividad inhibidora de la peroxidación de lípidos se determinó en los riñones de rata aislados que eran eléctricamente se homogeneizaron en 50 mM enfriado en hielo solución salina tampón fosfato (PBS) y se ajustó a pH 7,4. El homogeneizado se procesa adicionalmente, y la actividad inhibidora de la peroxidación de lípidos se determinó por un método descrito 23. La relación de inhibición se calculó usando la fórmula dada para la actividad de eliminación de radicales libres. 2.5. Estudios in vivo 2.5.1. Animales El cuidado de los animales y la manipulación se ha ajustado a las directrices estándar internacionalmente aceptadas para el uso de los animales, y el protocolo fue aprobado por el comité de ética institucional animales (AICE número P25 / 7-2011 / GBR) en el Instituto Nacional de Nutrición, Hyderabad, India. ratas Wistar (muestras de orina 180H, se retiró la comida. 2.5.2. Preparación de GPAE y Cystone para alimentación gástrica Inicialmente, GPF se preparó mezclando igualmente las partes respectivas de cada planta en una proporción de 1 mg por mililitro de solución. 2.5.3 . diurético actividad de GPAE la actividad diurética de GPAE se estudió en ratas Wistar de ambos sexos (intervalos 180H. se recogió la orina total excretado a cabo y se determinó el volumen. el pH de la orina reunida de cada animal se determinó mediante el uso de metros pH, concentraciones de Na y K en fotómetro de llama, y ​​la concentración de Ca 2 mediante el uso de kits disponibles en el mercado. 2.5.4. Efecto de GPAE y Cystone en el modelo Animal de la actividad urolitiasis Antiurolithic de GPAE y Cystone se determinó en un modelo animal de calcio urolitiasis de oxalato como se describe por Atmani et al. se seleccionó 25. la dosis que había causado el aumento significativo de la producción de orina en el estudio diuresis para este estudio. Veinticuatro ratas Wistar macho (180g de pesada) se dividieron con pesos corporales emparejados en 5 grupos de 6 animales cada uno , que fueron seleccionados al azar para recibir diversos tratamientos de la siguiente manera. las ratas del grupo I, sirvió como control tratado con vehículo, recibieron por vía intraperitoneal (ip) de solución salina normal (2,5h y agua ad libitum al día durante 21 días (control normal). ratas del grupo II recibieron tratamiento con piedras que inducen durante 21 días, compuesto por 0.75 EG solo en el agua, junto con el tratamiento de solución salina (grupo control positivo urolithic). ratas grupo III recibió GPAE (50 mg / kg) a través de gavages gástricas y reciben simultáneamente tratamiento de piedra que induce similar al control positivo al día durante 21 días (grupo de tratamiento, dosis baja). grupo IV ratas recibieron GPAE (100 mg / kg) a través de gavages gástricas y reciben simultáneamente tratamiento de piedra que induce similar al control positivo al día durante 21 días (grupo de tratamiento, la dosis alta). grupo V ratas recibieron estándar de medicamentos-Cystone, (100 mg / kg) a través de gavages gástricas y simultáneamente recibido tratamiento piedra inductor similar al control positivo al día durante 21 días (grupo de tratamiento, medicamentos estándar). 2.5.5. examen bioquímico Inmediatamente antes y al final de un total de 21 días de tratamiento, 24C hasta el análisis. En las muestras de orina acidificadas, oxalato, calcio (Ca 2) y magnesio (Mg 2) contenidos se determinaron mediante el uso de kits disponibles en el mercado, mientras que la excreción de fosfato inorgánico se determinó por el método reportado 26. En las muestras de orina nonacidified, citrato, creatinina y ácido úrico, mientras que en el suero, creatinina y BUN se estimaron con la ayuda de métodos basados ​​en el kit. La sangre se recogió mediante punción cardiaca de los animales bajo anestesia con éter, y se cortaron en consecuencia, tanto los riñones y el hígado. Los animales se sacrificaron entonces mediante inhalación de CO2. 2.5.6. Examen histopatológico Los órganos fueron lavadas en solución salina fisiológica fría de hielo y se pesaron. El riñón derecho se fijó en 10 m, y se tiñeron con hematoxilina y eosina para su examen al microscopio de luz polarizada. Para contar el número de depósitos cristalinos, un campo de 100x fue luego seleccionado al azar de cada región, y se contaron los depósitos de oxalato de calcio. Se informó que el número total de depósitos en cada muestra, y el contenido de calcio en los tejidos del riñón se determinó por espectrofotometría de absorción atómica. 2.5.7. La peroxidación lipídica Efecto inhibitorio El riñón izquierdo se trabajó en 10 g, y los sobrenadantes se utilizaron para evaluar diversas actividades antioxidantes y enzimas formando oxalato y parámetros bioquímicos como el glutatión reducido (GSH), malondialdehído (MDA), y el contenido de proteínas carbonilo. homogeneizados de riñón se estimaron para el contenido de MDA con ácido tiobarbitúrico método reactiva 27. El contenido de carbonilo de proteínas se estimó por la derivatización de proteínas con hidrazina dinitrofenilo (DNPH) en hidrazonas dinitrofenilo cromóforos por el método de Levine et al. 28, y el contenido de carbonilo se calculó utilizando el coeficiente de extinción molar DNPH de 22,000C. actividad glicolato oxidasa (GOx) en el hígado y la lactato deshidrogenasa (LDH) en el hígado y riñón se determinó por el método reportado 31. 32. 2.5.8. Análisis estadístico Los datos expresados ​​son valores medios de menos de 0,05 se consideran como significativos. Las curvas de concentración-respuesta se analizaron por regresión no lineal utilizando Graph Pad Prism (Graph Software Pad, San Diego, CA, EE. UU.). 3. Resultado 3.1. Estudios in vitro 3.1.1. Antioxidante Efecto GPAE reveló la actividad de eliminación de radicales DPPH con IC 50 valor de 2,5 (ml, respectivamente. (A) la actividad de 1,05 g / DPPH radical de barrido. (B) La peroxidación lipídica efecto inhibidor de GPAE y el hidroxitolueno butilado fármaco de referencia (BHT). Símbolos mostrados son media ± SEM (n 3). (a) (b) 3.2. Estudios in vivo 3.2.1. efecto diurético El efecto de varias dosis de GPAE en el volumen de orina de la rata, el pH, y Na. K. y la excreción de Ca 2 es dada en la Tabla 1. GPAE aumentó el volumen de orina en 50 mg / kg). Goskshuradi efecto diurético de extractos acuosos poliherbal (GPAEs). Los valores dados son la media S. E.M. (N 6). 0,01 versus control. 3.2.2. Efecto observado en el modelo animal Los parámetros de línea de base registrados antes del inicio de tratamiento como los pesos corporales, el consumo de agua junto con el volumen de orina, el pH, y la composición no fueron significativamente diferentes entre todos los grupos. Los parámetros registrados después del tratamiento se dan en la Tabla 2. En comparación con los animales de control normales, de toma de agua y 24s riñones fueron ligeramente más pesados ​​que los los animales de control (Tabla 4). Efecto de GPAE y medicamentos estándar de parámetros bioquímicos urinarios 24h. 100 mg de medicamentos estándar / kg Cambio en el peso corporal () 2,32 1,45 8,86 2,06 5,43 1,23 La ingesta de agua ml / 24 h 10.46 1.26 1.17 8.45 0.68 0.11 3.16 0.64 3.76 0.31 Los valores dados son malos S. E.M. (N 6). 0,01 frente al grupo control. P 0,01 frente al grupo urolithic. un fosfato inorgánico. El ácido úrico b. Se encontró que el tratamiento Urolithic perturbar la función renal en animales urolithic como se desprende del aumento de BUN y creatinina sérica y el aclaramiento de creatinina reducida. GPAE tratados con grupos disminuyeron la creatinina sérica y los niveles de BUN en 100 mg / kg (Tabla 3). Efecto de GPAE y de medicamentos estándar de los parámetros de suero. Los valores dados son la media de 0,01 frente al grupo urolithic. f Crystal depósitos / 100x: campo, g malondialdehído, h contenido de proteínas carbonilo, i glutatión reducido, superóxido j dismutasa, peroxidasa k glutatión, l catalasa, m glicolato oxidasa (nmol de glioxilato formado / mg de proteína), n hepática de lactato deshidrogenasa (U / mg de proteína), o lactato deshidrogenasa renal (U / mg de proteína), y el contenido de calcio p riñón. estudios histológicos de las regiones del riñón como corteza, médula, y la papila en los animales mostraron urolithic muchos depósitos cristalinos birrefringente bajo microscopio de luz polarizada (figura 2 (b)). Estos depósitos se encuentran en 3 de 6 ratas de GPAE dosis baja (Figura 2 (c)), 1 de cada 6 ratas de dosis alta GPAE (Figura 2 (d)), y 3 de 6 ratas (Figura 2 (e )) de grupo Cystone pero visiblemente más pequeños y menos abundantes en comparación con los animales de control urolithic. La morfología del tejido y integridad de los riñones de GPAE - y grupos tratados con Cystone fueron comparables a los animales de control normales (Figura 2 (a)). El análisis de espectrofotometría de absorción atómica mostró disminución de contenido de Ca en el GPAE - y Cystone - (P 0,01) (Tabla 4). (A) la estructura celular normal de las ratas de control del riñón (Gr I). (B) etileno-glicol inducida por las ratas urolithic riñón que muestra cristales irregulares dilatación y la inflamación bajo el microscopio polarizado (Gr II). (C) Los riñones de ratas tratadas con urolithic GPAE (50 mg / kg) que muestra la estructura celular normal (Gr. V). La flecha indica cristales CaOx. (A) (b) (c) (d) (e) 3.2.3. Peroxidación lipídica Efecto inhibidor de Piedra inducir tratamiento aumentó MDA y el contenido de proteínas carbonilo (P 0,01) en el hígado y se encontraron los riñones para ser mejorado en el grupo urolithic en comparación con los animales control, mientras que se encontró que el tratamiento con GPAE tener un efecto protector contra este efecto y cambios oxidativos inducida por el tratamiento urolithic en dosis más altas (Tabla 4. La Figura 1 (b)). Fitoterapia enfoque se intenta en este estudio como una alternativa a la atención primaria de salud. El Goskshuradi poliherbal Formulación (GPF) que tradicionalmente está siendo utilizado en la medicina popular de la India desde hace varias décadas para tratar los cálculos renales fue evaluada por sus efectos antiurolithic. En nuestros estudios anteriores, hemos evaluado clínicamente la eficacia de esta preparación y su potencial encontrado en pacientes urolithic inducidas de forma natural 4. El presente estudio es un enfoque farmacología inversa en la que se llevaron a cabo los estudios científicos en condiciones controladas para validar el uso tradicional de GPF y determinar su mecanismo de acción en urolitiasis de oxalato de calcio. el desarrollo de cálculos de oxalato de calcio es un proceso multifactorial que involucra diversos factores etiológicos. Los estudios han demostrado que la deposición de cristales de oxalato de calcio conduce a la lesión celular mediada por la peroxidación de lípidos a través de la generación de radicales libres de oxígeno. Los estudios revelaron que estas lesiones celulares favorecen la retención de los acontecimientos de oxalato de calcio en los túbulos renales, que es importante para el desarrollo ulterior de piedra 33 39. A este respecto, el potencial antioxidante de GPAE se determinó mediante barrido y la peroxidación lipídica actividad inhibidora de radical libre para estudiar su mecanismo de acción. Curiosamente, GPAE reveló DPPH captación de radicales libres y se inhibe la peroxidación lipídica de homogeneizado de riñón de rata similar a una sustancia química antioxidante estándar, BHT. En el estudio de la actividad diurética, GPAE altera la producción de orina de una manera dependiente de la dosis y la diuresis máxima observada a 100 mg / kg como la de los grupos tratados con furosemida. Estos efectos hipocalciúrica y diuréticas de GPAE pueden ayudar a reducir la sobresaturación urinaria de sales de calcio y por lo tanto puede evitar una mayor formación de cálculos. Además efecto antiurolithic de GPAE se evaluó en un modelo animal de la urolitiasis inducida por etilenglicol y cloruro de amonio en combinación. Este modelo se utiliza con frecuencia en la formación de cálculos de oxalato de calcio y por lo tanto fue seleccionado para este estudio 25. 40. 41. Después de 21 días, la administración de EG AC mostró cristales más grandes y agregados en los animales control urolithic en comparación con los grupos tratados con Cystone GPAE - y. Estos aglomerados de cristales de oxalato de calcio se depositan en los túbulos renales y desarrollar aún más en los cálculos renales 25. GPAE redujo la poliuria asociada con el tratamiento litogénica en comparación con grupos de control urolithic. De acuerdo con los informes anteriores, el tratamiento de inducción de piedra conduce un aumento de oxalato y disminución de la excreción de Ca 2. Esto se confirma en el presente estudio en el que los animales de control urolithic mostraron un efecto similar, y GPAE - y los grupos tratados con Cystone invierte este efecto 42. 43. tratamiento litogénico resultó en una mayor deposición de oxalato de calcio en los grupos de control urolithic junto con el estrés oxidativo determinado por el aumento de los niveles de marcadores de daño oxidativo, es decir, MDA y proteínas carbonilo contenido, junto con disminución de la actividad de las enzimas antioxidantes y los niveles de GSH en los riñones acompañado con la función renal anormal. Los túbulos renales estaban dilatadas en los riñones enteros de todas las ratas no tratadas que conducen a flujo renal alterada por grandes agregados de cristales. Sin embargo, GPAE reveló disminución significativa en todos estos marcadores litogénicos a dosis más altas junto con la actividad antioxidante. La presente investigación informa el potencial antiurolithic significativa de GPAE en dosis más altas por la combinación de antioxidante, diurético, y los efectos hipocalciúrica. Los resultados de la formulación se encontraron significativa en comparación con Cystone que es un fármaco estándar disponible en el mercado usado en el tratamiento de la urolitiasis, y actividad diurética era comparable con el fármaco diurético estándar, furosemida. El efecto inhibidor de GPAE en la retención de cristales de oxalato de calcio en los túbulos renales por lo tanto se puede atribuir a su diurético, efecto hipocalciúrica, antioxidante junto con su potencial para inhibir parámetros bioquímicos implicados en el metabolismo de oxalato que racionalizar su uso medicinal para la enfermedad de cálculos urinarios. El presente estudio será sin duda beneficiará a la comunidad científica a nivel mundial en el suministro de una fuente para el aislamiento y el diseño de una molécula en esta línea de investigación.